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數(shù)字PCR突變檢測介紹數(shù)字PCR(digitalPCR,dPCR)通過將微量樣品進行微滴化處理,即稀釋和分液,直每個細分樣品中所含有的待測分子數(shù)一般不超過1(0或1)個,將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴。再將所有微量樣品在相同條件下進行PCR擴增反應,使含有目標分子的微量樣品中的目標分子增加成千上萬倍,產(chǎn)生強的熒光信號,后對發(fā)生了擴增反應的微量樣品進行統(tǒng)計,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶...
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TaqMan探針法是針對DNA上的SNP位點設計PCR引物和TaqMan探針,進行實時熒光PCR擴增檢測的方法,通常用于少量SNP位點的分析,核酸定量分析以及腫瘤細胞突變分析等。探針的5’-端和3’-端分別標記一個熒光報告基團(Reporter,如FAM、VIC、HEX等)和一個熒光淬滅基團(Quencher,如TAMRA、BHQ1等)。當熒光探針保持完整時,5′-端報告基團經(jīng)儀器光源激發(fā)的熒光正好被近距離的3′端熒光基團淬滅,儀器檢測不到5′端報告基團所激發(fā)的熒光信號。PC...
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SNaPshot基因分型技術是由美國ABI公司開發(fā)的一種基于熒光標記單堿基延伸鏈終止反應原理的分型技術,主要針對中小通量的SNP分型項目。簡單說來,在一個含有測序酶、四種熒光標記ddNTP、緊臨SNP位點5’-端的不同長度延伸引物和模板DNA的反應體系中,引物延伸一個堿基即終止,經(jīng)ABI3730XL測序儀檢測后,根據(jù)峰的位置確定該延伸產(chǎn)物對應的SNP位點,而根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類,從而確定該樣本的基因型。同時,通過多重PCR反應體系,可以同時檢測多種SNP位點,通常...
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質(zhì)譜法基因分型技術簡介DNA質(zhì)譜陣列基因分析系統(tǒng)以其通量高、自動化、靈活、結(jié)果準確、實驗成本低廉等諸多優(yōu)勢成為了大學、醫(yī)學生物學研究所、生物技術公司、制藥企業(yè)、疾控中心等機構所推崇的研究工具。應用領域涵蓋醫(yī)學及轉(zhuǎn)化醫(yī)學、分子生物學、基因組學、表觀遺傳學、農(nóng)業(yè)遺傳育種及轉(zhuǎn)基因技術等相關領域。檢測儀器信息SequenomMassArray時間飛行質(zhì)譜生物芯片系統(tǒng)是為基因組學研究提供兼顧靈敏度和特異服務的中高通量技術平臺,廣泛地應用于遺傳突變檢測、SNP分型以及DNA甲基化定量分析...
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